ELISA试剂盒实验中显色步骤的操作方法
ELISA试剂盒实验中显色是最后一步温育反响,此刻酶催化无色的底物生成有色的产品。
恰当进步温度有助于加快显色进行。
在定量测定中,参加底物后的反响温度和时刻应按规则力求准确。
定性测定的显色可在室温进行,时刻通常不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色状况恰当缩短或延伸反响时刻,及时判别。
OPD底物显色通常在室外温或37℃反响20-30分钟后即不再加深,再延伸反响时刻,可使本底值增高。
反响的温度和时刻仍是影响显色的要素。
在必定时刻内,阴性孔可坚持无色,而阳性孔则随时刻的延伸而呈色加强。
ELISA试剂盒实验OPD底物液受光照会自行变色,显色反响应避光进行,显色反响结束时参加停止液停止反响。
TMB的停止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反响停止。
这类停止剂尚能使蓝色保持较长时刻(12-24小时)不褪,是目视判别的良好停止剂。
ELISA试剂盒此外,各类酸性停止液则会使蓝色转变成黄色,此刻可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
OPD产品用硫酸停止后,显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反响观察成果。
但为确保试验成果的稳定性,宜在规则的恰当时刻阅览成果。
ELISA试剂盒实验TMB经HRP作用后,约40分钟显色达高峰,随即逐渐削弱,至2小时后即可彻底衰退至无色。