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ELISA实验中各种方法原理及优缺点比较(超详细,版主多年经验总结)

2017-05-02

ELISA实验中各种方法原理及优缺点比较(超详细,版主多年经验总结)

 ELISE实验是指酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay)指在固定相上进行免疫酶技术,其依据有1:蛋白质可以吸附到固定相上而不改变其活性,2:抗原或抗体与酶交联以后仍可保持其活性及酶的催化活性,3:交联后的酶可以与反应底物进行反应,并催化其分解,产生有色物质。根据有色物质的多少,即颜色的深浅,通过酶标仪测定其颜色与标准物质颜色的差异,根据酶测曲线得出其浓度。 ELISE实验基本类型有直接法、间接法、抗体夹心法、竞争法、抑制法。 现将各种方法原理及优缺点总结如下: 一:直接法 直接法利用抗原结合在固定相上面,用酶联抗体直接与抗原结合,而后分解底物。 二:间接法 间接法利用抗原与固定相结合后,用一抗与抗原结合,再用二抗V区和一抗S区结合。酶联抗体位于二抗上。由于一抗V区具有稳定性,S区具有可变性,所以在与不同抗原结合时,
V区变化而S区不变,故间接法可以测定 三:双抗夹心法 利用抗体锚定在固定相上,抗原与其结合后,抗原的另外一个表位与酶联抗体结合,催化底物分解,故双抗夹心法适用于某些大TMB wash wash wash 分子的具有至少双表位的抗原 四:竞争法 竞争法是指针对抗原上同一抗原表位,分别用抗体与酶联抗体先后与其结合,抗体占据表位后,酶联抗体不能再与抗原结合而被洗涤液冲走,故催化底物反应的能力相应下降。此法适应于小分子或只有一个抗原表位或重复抗原表位的抗原。