Elisa试剂盒检测中血清样本采集处理方法

临床化学检验血液标本是指为完成某项或多项临床化学检验项目而采集的一定量的血液，包括抗凝及非抗凝血。而Elisa试剂盒检测中血液样本可以是多个种类，比如，人，大鼠，小鼠等动植物。

标本类型

临床化学检验血液标本分为血清、血浆和全血3种。血清和血浆为临床常用，除前者不含纤维蛋白原外，其余多数化学成分无差异；全血只有在红细胞内成分与血浆成分相似时才用；血气分析、血红蛋白电泳等时用全血，一般临床化学分析多不用全血。

全血处理为血清或血浆

血液标本采取后应尽可能早地自然地使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离出来。

一般应于采血后2h内分离出血清或血浆。全血处理为血清或血浆分为离心前、离心中和离心后三个阶段，对各不同阶段均有具体要求。

（一）离心前阶段

即指标本采集到离心处理前的一段时间。

1.血清：标本离心前一般应令其自行凝集，不可用木棍等剥离凝血块。

通常于室温（22～25℃）放置30～60min血标本可自发完全凝集；冷藏标本凝集缓慢；加促凝剂时凝集加快（标本采集后应轻轻颠倒混合5～10次，以确保促凝剂作用）。

2.血浆：需用血浆标本时，必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，而且采血后必须立即轻轻颠倒采血管混合5～10次（以确保抗凝剂发挥作用），5～10min后即可分离出血浆。

3.冷藏标本：标本冷藏可抑制细胞代谢，稳定某些温度依赖性成分但全血标本一般不能冷藏；血钾测定标本冷藏不得超过2h.血液中儿茶酚胺、pH／血气、氨、乳酸、丙酮酸、胃泌素、甲状腺激素等检测时需用制冷的标本。

标本需要冷藏（2～8℃）时，标本采取后应立即将标本置于冰屑或冰水混合物（不可用大冰块），并且必须保证标本与制冷物充分接触，保证制冷物达到标本的高度。

4.代谢抑制剂和防腐剂：某些添加剂加入血液标本中能抑制细胞代谢，可以防止血液标本贮存时分析物浓度的变化。

血液葡萄糖测定时，如在血液中加入氟化钠，在血细胞未分离的情况下，葡萄糖在22～25℃时可稳定24h，2～8℃时可以稳定48h；但在新生儿和儿童标本，由于红细胞压积高，用氟化钠难以控制细胞的糖酵解作用；甲醛－草酸钾抗凝保存剂不适合血糖测定；氟化钠－麝香草酚混合剂因能抑制酶活性，不适用于酶学测定。

5.标本采集现场：（1）标本采集后应尽快送往实验室，尤其当收集区温度超过22℃时此点更为重要；（2）血液标本采集后血管必须加塞、管口向上、垂直放置，以减少管中内容物振动，促进凝血完全，防止标本蒸发、污染和外溅等；（3）已收集的血液标本应温和地处理，要防止标本管振荡所造成的溶血；溶血可影响测定结果。

有严重影响（使结果升高）的项目有：乳酸脱氢酶、血清门冬氨酸氨基转移酶、血清钾和血红蛋白；引起值得注意的影响的项目有：血清铁（↑）、血清丙氨酸氨基转移酶（↑）和血清甲状腺素（↓）；轻度受影响（增加）的有：总蛋白、白蛋白、血清磷、血清镁、血清钙和酸性磷酸酶；

6.标本运送：全血标本应尽快从采血现场运送至实验室，如果运送距离较远，特别是因分析物稳定性有影响，必要时可于采血现场分离出血清或血浆后，再送往实验室；标本运送过程中要注意标本的包装、温度要求、处理方法等，要确保分析成分的稳定性；标本管在运送过程中要保持管口封闭、向上垂直放置。

7.实验室接受标本及离心标本准备：（1）要有标本收取记录（应认真核对检验中清单，对有关情况要认真记录，标本接收及处理应签字登记）；

（2）对接受的标本要予以分类准备离心；（3）实验室接受标本后应仍保持标本管于密闭封口、管口向上，垂直位放置。管塞移去后血中CO2丢失，会造成pH增加，离子钙和酸性磷酸酶减少，尤其pH变化会影响某些检测结果的准确性；（4）标本凝集时间要充分；加抗凝剂的血液标本可以立即离心；加促凝剂的标本可于采血后5～15min尽早离心；抗凝的全血标本（锌、锂、原卟啉等测定时）可以不离心；（5）冷藏（2～8℃）标本应保持这个温度直到准备离心。推荐用温度控制离心机；（6）离心标本前不主张用小木棒或类似器材去剥离附着于试管壁和管塞上的凝块，人为剥离会诱导溶血。如果必须露出试管壁或取下管塞时，一定要十分注意，动作一定要轻柔。

（二）离心阶段

即指标本处于离心机里的一段时间。

1.离心时间和相对离心力（RCF）：临床化学分析血液标本离心时，RCF（1000～1200）xg，离心时间为5～10min.

2.温度控制离心：离心时产热不利于分析物稳定，临床化学分析血液标本离心时必须采用温度控制离心机。一些温度依赖性分析物（如促肾上腺皮质激素、环腺苷酸、儿茶酚胺等）应在4℃分离；无特殊温度要求的分析物，离心温度应设定在20℃～22℃；温度低于15℃可以人为地使血钾测定值增高；冷藏运送的标本必须在要求的温度下离心。

3.关于再离心：标本离心最好一次完成，若需再次离心，应距上次离心相隔时间很短；对于含有分离物质的血标本绝不可以再离心。

（三）离心后阶段

指标本离心后和用于检测的血清或血浆被取出一定量之前的一段时间。

1.血清或血浆与接触的血细胞和凝块的分离应在采血后尽快（2h内）完成。

2.分离的血清或血浆的贮存：实验室的室温和血清或血浆的贮存温度、时间，是分析物稳定性和测定结果准确性的重要参数。

（1）于22℃～25℃血清或血浆的保存不超过8h；

（2）实验于8h内不能完成时，血清或血浆应置2℃～8℃保存；

（3）48h内不能完成的实验项目，或分离的血清或血浆需贮存48h以上时，应于-20℃保存；

（4）标本不可反复冻融（只能冻融一次），且不可贮存于无霜冰箱（可造成样品温度变化）；

（5）离心后分离凝胶（凝胶屏障）上面的血清可保存2～5天（亦有报道4℃可贮存24h），但必须保证凝胶的完整性；但应用非凝胶分离物质时，离心后必须立即将血清或血浆移出。

（6）血清或血浆必须保存于密闭的试管中。

ELISA实验中血清的采集、处理和保存；
1、 真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；
2、 采血后室温静置1小时；
3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用，
2-8℃下，可放置保存24-48小时；
-20℃下，可放置保存1个月；
-70℃下，可放置保存6个月；
5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 
大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的 ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。