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细菌质体需藉转形 (transformation) 技术

2018-03-29

细菌质体需藉转形 (transformation) 技术

细菌质体需藉由转形 (transformation) 的技术,将的引介入细菌体中,藉由寄主细菌的系统达成复制或进基因表现的目的。寄主细菌的选择,须视质体的种类及实验的目的而定。本实验的目的在建构一个表现质体,使的能在大肠杆菌中大表现 GUS。蛋白

然而,用大肠杆菌进外源基因的表现时,常遇到的问题是,外源基因的产物会对寄主细菌造成伤害;此外,持续断的表现外源基因也会使寄主细菌生长减慢或无法生长。因此,必须有适当的调控机制控制外源基因的表现。蛋白 我们所用的载体pQE31 在T5 promoter与外源基因插入地址的间,具有一段lac operon中的lacO序,可用lac repressor结合其上调控T5 promoter的启动,只有在inducer (如IPTG) 加入时,才会启动转录的进,而lac repressor的源则必须靠寄主提供。

由于此质体为multiple copies,一般大肠杆菌菌株中lac repressor的含足以有效地进调控,纵使未加入inducer,也会有外源蛋白质的表现,万一外源蛋白质对寄主造成毒害,使的无法生长,我们可能表现质体无法选殖到,无法达成我们的实验目的。 我们所选用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq,能够过表现 (overproduce) lac repressor,因此可较有效地控制T5 promoter的启动。 然而,是JM109 这一类带有lacIq的菌株发生问题时,就必须再换其它的寄主菌株;如M15[pREP4],此菌株除染色体上的lacI基因外,还带有能持续表现lacrepressor的质体,应可解决lac repressor 足的问题。