即用型荧光定量PCR试剂盒-荧光试剂盒产品及特点

本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。

即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。

主要成分只有两个（RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix），将加样步骤减少到*，极大降低了加样误差，增加了可重复性。

使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。

高灵敏度，每个RT-PCR体系*可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的最长达2000 nt。

即用型荧光定量PCR试剂盒-荧光试剂盒规格及成分

成  份

50次

塑料袋包装

300次

塑料袋包装

双酶一管式qRT-PCR Buffer，2×

750 uL

4.5 mL

MMLV-Taq Mix

100 uL

600 uL

RNase-free水

1 mL

6 mL

即用型荧光定量PCR试剂盒-荧光试剂盒使用手册

1份

1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存, 保存期限为一年。

自备试剂

RNA模板、引物。有的机型需要自备ROX。

使用方法

在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分（下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照）：

成分

样品

自备RNA模板（分下面三种情况）

见下

总RNA

100-500 ng

或poly(A) mRNA

10-500 ng

或体外转录得到的专一RNA

0.01 pg-500ng

RNA特异性引物一（自备）

终浓度300nM（注1）

RNA特异性引物二（自备）

终浓度300nM

RNase-free水

补到10 uL

双酶一管式qRT-PCR Buffer（2×）

15 uL

自备ROX（某些荧光PCR机型需要）

3 uL（注2）

MMLV-Taq Mix

2 uL

即用型荧光定量PCR试剂盒-荧光试剂盒注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。

注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的*浓度为1×（即在每30 uL 反应体系中加3 uL 10×ROX）。对ABI 7500， ROX的*浓度为0.05-0.1×（每30 uL 反应体系加0.3 uL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3 uL 1×ROX）。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。

轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。

设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环（PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注）、*72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，*吸收光谱在471nm，结合DNA时的*吸收光谱在500nm，*发射光谱在530nm。

即用型荧光定量PCR试剂盒-荧光试剂盒关联产品

即用型荧光定量PCR试剂盒、PCR级绿如蓝染料。