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ECC10细胞(小鼠子宫内膜癌细胞)
一、细胞基本属性 | |
细胞名称 | ECC10细胞(小鼠子宫内膜癌细胞) |
细胞别称 | ECC10 |
商品货号 | KL-C0029M |
种属来源 | 小鼠 |
年龄性别 | - |
组织来源 | 子宫 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 圆形或卵圆形 |
背景简介 | ECC10细胞建系机构未明确公开,最早于 20 世纪 90 年代末被报道用于胃小细胞癌相关研究,目前无 ATCC 等国际标准库收录记录,主要通过科研机构内部馈赠或专项生物资源平台获取 |
生物安全等级 | - |
细胞规格 | 1×10^6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体检测 | 无 |
培养基 | RPMI-1640 培养基(含 L - 谷氨酰胺),添加 10% 胎牛血清(FBS)、100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
倍增时间 | ~24-30小时 |
二、细胞接收后的处理
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2) 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 贴壁细胞:细胞在室温中放置1h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4) 细胞运输途中脱落操作方法:把脱落的细胞收集离心后弃上清,用PBS清洗一遍,离心弃上清,在离心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右,加完全培养基终止消化后离心重新铺平,剩下的贴壁细胞就按照正常贴壁细胞传代方法操作。
5) 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
三、细胞培养操作
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a) 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b) 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。
c) 轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d) 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
贴壁细胞传代注意点:
l 一定要PBS洗一遍。
l 细胞多观察几次掌握时间,不要在细胞没有基本脱落就终止消化然后吹打下来,这样细胞 更容易分化和死亡。
l 不要一直对细胞吹打
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a) 收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b) 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c) 将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、培养注意事项
1) 细胞出现问题,予以重发情况
a) 细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
b) 细胞污染问题,请在收到产品3 天内,给我们提出真实的实验结果,核实后重发;
c) 常温发货的细胞静置2小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后,绝大多数细胞未存活,(需提供真实清晰的细胞状态照片),重发;
d) 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封,出现污染,重发;
e) 细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,和每天的细胞照片,核实后予重发;
f) 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照,3 天未告知的,视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤,并跟技术人员沟通的,由技术人员判定为我方责任的,重发。
2) 细胞出现问题,不予以重发的情况
a) 客户操作造成细胞污染,不重发;
b) 客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发;
c) 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
d) 细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片,不重发;
e) 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发;
f) 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的,不重发;
g) 视具体情况而定
五、注意事项
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
3. 该细胞仅供科研使用!说明书仅供参考以实际到货说明书为准!
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