人肝癌乐伐替尼耐药株;HUH7/Lenvatinib 

二、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2) 离心管直接在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞后,根据离心后的沉淀量进行传代,转移至T25培养瓶中后,请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3) 悬浮细胞:传代时使用【半换液法】对细胞状态有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代,刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。

4) 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 

三、细胞培养操作

1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含8mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

a) 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b) 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。

c) 轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。          

d) 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。