pCSN2-HLZ荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

pCSN2-HLZ荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

pCSN2-HLZ荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

pCSN2-HLZ荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

Hep3B2.1-7 KL1045 人肝癌细胞,Hep3B2.1-7细胞

Hep G2 KL1046 人肝癌细胞,Hep G2细胞

JRDC054 KL1047 人肝癌细胞,hep 3B细胞, hep 3B

Hep 3B2.1-7 KL1048 人肝癌细胞,Hep 3B2.1-7细胞

HCC-9724 KL1049 人肝癌细胞,HCC-9724细胞

H7402 KL1050 人肝癌细胞,H7402细胞

FL62891 KL1051 人肝癌细胞,FL62891细胞

Bel-7405 KL1052 人肝癌细胞,Bel-7405细胞

BEL-7402 KL1053 人肝癌细胞,BEL-7402细胞

97H-EGFP-puro KL1054 人肝癌细胞,97H-EGFP-puro细胞

9204 KL1055 人肝癌细胞,9204细胞

CRIC020 KL1056 人肝癌 QGY-Q3*细胞, QGY-Q3*

AMS2 KL1057 人干细胞因子单克隆抗体细胞株 AMS2细胞

BB7.2 KL1058 人分泌A2抗体B淋巴细胞,BB7.2细胞

NCI-H1650 KL1059 人肺支气管癌细胞,NCI-H1650细胞

NCI-H2227 KL1060 人肺小细胞肺癌 NCI-H2227细胞

NCI-H596 KL1061 人肺腺鳞癌细胞,NCI-H596细胞

L78 KL1062 人肺腺鳞癌细胞,L78细胞

PG49 KL1063 人肺腺癌细胞系 PG49细胞

GLC-82-TK KL1064 人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞） GLC-82-TK细胞

Calu-3 KL1065 人肺腺癌细胞（胸膜渗出液）Calu-3细胞

SPC-A-1 KL1066 人肺腺癌细胞,SPC-A-1细胞

PC-9 KL1067 人肺腺癌细胞,PC-9细胞

PAa KL1068 人肺腺癌细胞,PAa细胞

NCI-H441 [H441] KL1069 人肺腺癌细胞,NCI-H441 [H441]细胞

NCI-H292 KL1070 人肺腺癌细胞,NCI-H292细胞

NCI-H1975 KL1071 人肺腺癌细胞,NCI-H1975细胞

CASC162 KL1072 人肺腺癌细胞,NCI-H1395细胞, NCI-H1395

LTPEP-a-2 KL1073 人肺腺癌细胞,LTPEP-a-2细胞

Human H1299 KL1074 人肺腺癌细胞,Human H1299细胞

H1299 KL1075 人肺腺癌细胞,H1299细胞

GLC-82 KL1076 人肺腺癌细胞,GLC-82细胞

Calu-3 KL1077 人肺腺癌细胞,Calu-3细胞